3. Технология производства препарата трипсин на ООО «Самсон-Мед»
Основное назначение трипсина — (trypsinum) в качестве ферментного препарата. Выпускают трипсин по ГФ Х ст 703. Номер регистрационного удостоверения р.72.736.19/1на ООО «Самсон – Мед».
Трипсин представляет собой ферментный препарат протеолитического действия. Внешний вид — пористая масса или порошок белого со слегка желтоватым оттенком цвета, без запаха. Легко растворим в воде и изотоническом 0,9% растворе хлорида натрия. Стерилен, апирогенен, нетоксичен. Активность препарата определяют биохимическим методом по Ансону. 1 г препарата содержит не менее восьми тирозиновых единиц. Трипсин — обладает выраженными противовоспалительными и противоотечными свойствами, способен расщеплять омертвевшие участки тканей, фиброзные образования [7].
Для изготовления трипсина в качестве сырья берут поджелудочную железу крупного рогатого скота. Поджелудочные железы должны быть собраны раздельно от каждого вида скота и обработаны по технологической инструкции с соблюдений санитарных правил [1].
По органолептическим и физико-химическим показателям поджелудочные железы должны соответствовать требованиям ГОСТ 11285-93[1].
а) внешний вид — железы должны быть очищены от наружного жира и прирезей соединительной ткани, иметь цельную поверхность без повреждений, и заморожены поштучно или в виде пластин или блоков толщиной не более 5см.
б) цвет — от розового с желтоватым оттенком до розовато- красного.
в) температура внутри блока или отдельной железы при приемке, не выше
-18 ̊ С.
Отбор и подготовка проб. Для проведения испытаний при замораживании поджелудочных желез поштучно берут не менее чем по 5 желез из каждого ящика, а при замораживании ПЖ в блоках из разных слоев каждого ящика, отобранного в выборку, отбирают точечные пробы массой 180—200 г. Из точечных проб составляют объединенную пробу массой (1000±20) г, измельчают на мясорубке и тщательно перемешивают, не допуская поднятия температуры в измельченной пробе выше 4°С.
Определение внешнего вида и цвета. Внешний вид и цвет, замороженных поджелудочных желез определяют визуально при дневном свете. Целостность желез и наличие на них прорезей жировой и соединительной тканей определяют после частичного оттаивания взятых на анализ желез путем визуального осмотра.
Определение температуры. Термометр стеклянный жидкостной (не ртутный), вмонтированный в металлическую оправу, с диапазоном измерения от — 38 до 0С° с допускаемой погрешностью измерения ±1 ̊ С. В замороженной поштучно или в виде блоков (пластин) ПЖ делают отверстие и термометром измеряют температуру на глубине 2,0±0.5 см. Отверстие можно сделать коловоротом вручную. Сверло коловорота должно быть предварительно охлаждено до температуры не выше — 18°С [1].
Компания ООО «Самсон-Мед» российское фармацевтическое предприятие полного производственного цикла: от производства субстанций до выпуска готовых лекарственных форм. Продукция компании завоевала себе прочное место на потребительском рынке труда и пользуется стабильным спросом.
Наиболее перспективными, с точки зрения получения высококачественных белков, являются методы избирательной сорбции на микропористых носителях – сорбентах, не изменяющих лабильную структуру ферментов. В настоящее время на предприятии ООО «Самсон — Мед» внедрена и успешно применяется эффективная сорбционная технология с использованием ионообменных процессов на стадиях разделения и очистки ферментов. Использование сорбционной технологии не только повысило качество выпускаемых препаратов, но и значительно сократило время технологического процесса, существенно снизило энергозатраты на производство единицы продукции [25].
Технологический процесс получения трипсина. В общем виде технология получения кристаллического трипсина на основе эндокринно-ферментного сырья животного происхождения основана на следующих операциях:
ТП.1.1. Приготовление экстракционной смеси.
ТП.1.2. Измельчение поджелудочной железы, первая экстракция.
ТП.1.3. вторая экстракция и разделительная фильтрация.
ТП.1.1.Приготовление экстракционной смеси. Для проведения экстракции используют 0,25н раствор серной кислоты. Соотношение объема экстракционной смеси к весу поджелудочной железы 2:1 (первая экстракция) и 1:1 (вторая экстракция). Для приготовления 0,25н раствора серной кислоты используют емкость.
Предварительно ее моют теплой водопроводной водой и ополаскивают дистиллированной водой. Затем в емкость заливают необходимое количество дистиллированной воды из сборника, добавляют туда расчетное количество серной кислоты предварительно разбавленной 1:1.
ТП.1.2 . Измельчение поджелудочной железы первая экстракция. 300 кг замороженной поджелудочной железы крупного рогатого скота, соответствующей требованиям ГОСТ 11285-93 [1], измельчают на измельчителе специальной конструкции. Измельченную поджелудочную железу собирают в емкости. Приготовленный раствор 0,25 н серной кислоты в количестве 600 мл из емкости с помощью вакуума перекачивают в реактор и охлаждают до температуры +12,+15, путем подачи рассола в рубашку реактора. Охлажденный раствор из реактора сливают в емкость для приема измельченной железы, оставив в реакторе необходимое количество серной кислоты для промывки линий в емкости. Загрузочный трубопровод промывают 0,25н раствором серной кислоты, сливая раствор в реактор. После загрузки всей железы в реактор начинают отсчет времени первой экстракции. Первую экстракцию ведут 16-17 часов при температуре не выше +5°С. Перемешивание, экстракционной смеси проводят автоматически: первые 2 часа — непрерывно, а затем периодически — каждый час по 15 мин.
За один час до конца экстракции добавляют, при перемешивании, кристаллический сульфат аммония до степени насыщения 0,05 и 1% (к общему объему смеси) кизельгура. После высаливания смесь отстаивают 1-2 часа [20]. После отстаивания надосадочную жидкость сифонируют в реактор. Для подавления роста микрофлоры допускается введение кристаллического фенола в количестве 1 кг на 1000 л экстракционной смеси.
ТП.1.3. Вторая экстракция и разделительная фильтрация. Вторую экстракцию проводят 0,25н раствором серной кислоты в соотношении 1:1, то есть на 1 кг поджелудочной железы берут 1 л 0,25 н раствора серной кислоты. В промежуточной емкости готовят необходимое количество 0,25 н раствора серной кислоты, перекачивают его в реактор, охлаждают до температуры от+3 до +5°С подачей рассола в рубашку реактора и снова перекачивают в промежуточную емкость. К оставшейся в реакторе № 2 экстракционной смеси добавляют подготовленный 0,25 н раствор серной кислоты и проводят вторую экстракцию. Вторую экстракции ведут 1 час при температуре от +3 до +5°С при непрерывном перемешивании.
По окончании экстракции экстракционную смесь подают самотеком на центрифугу НОГШ – 325, где жмых отделяют от экстракта. Экстракт с помощью вакуума передают в реактор.
Жмых после центрифугирования собирают в бачки и передают на завод технических фабрикатов для переработки. Фильтрацию экстракта проводят на фильтровальных ваннах. Предварительно ванны тщательно моют теплой водопроводной водой, ополаскивают дистиллированной водой и застилают фильтровальной тканью. Экстракт из реактора перекачивают с помощью центробежного насоса в холодную камеру №1 на фильтрующие ванны.
Фильтрацию проводят при температуре не выше +7°С. По мере замедления процесса фильтрации, ткани меняют, собирая остатки непрофильтрованного экстракта в сборник. Прозрачный фильтрат после фильтрации перекачивают с помощью вакуума в реактор для высаливания ДНК-азы. Температура фильтрата в реакторе должна быть не выше +5°С.
После окончания фильтрации трубопроводы и фильтровальные ванны промывают водопроводной водой. В технологическом журнале записывают объем фильтрата, его температуру, количество сульфата аммония.
ТП.1.4. Высаливание и отделение балластных белков. Измеряют общий объем экстрактов, полученных от первой и второй экстракции, его температуру (не выше +5°С). Высаливание балластных веществ, проводят кристаллическим сернокислым аммонием до степени насыщения 0,19. Для этого взвешивают необходимое количество сернокислого аммония и с помощью вакуума, небольшими порциями, при перемешивании, добавляют в экстракт. После высаливания, при необходимости для лучшего разделения фаз в экстракте, проводят смещение рН. Для этого, 25%-м раствором аммиака доводят сначала рН в экстракте до 8,6-9,0, а через 3-5 минут серной кислотой (разбавленной (1:1) до рН 2,7-3,0 ( по универсальной индикаторной бумаге) [20].
Для получения кристаллических ферментов и рибонуклеазы, высаливание балластных веществ, проводят до степени насыщения 0,37.
ТП.1.5 Выделение ДНК-азы высаливанием. Отстаивание и фильтрация. Высаливание ДНК-азы из фильтрата проводят кристаллическим сернокислым аммонием. Для этого в реактор добавляют при перемешивании порциями кристаллический сульфат аммония для степени насыщения 0,4. Температура высоленного раствора поддерживают не выше +5°С. После высаливания с поверхности реакционной смеси осторожно снимают пену. Осадок седиментируется не менее 40 часов при температуре не выше +5°С, температура которая автоматически поддерживается подачей рассола в рубашку реактора. Если частично осадок выплывает, то поверхностный слой осторожно перемешивают. По истечении времени седиментации, недосадочную жидкость сифонируют в реактор для производства химотрипсина, трипсина, РНК- азы и пантрипина.
Оставшуюся ферментную массу сливают самотеком на заранее смонтированный нутч-фильтр, где осадок отделяют, фильтрат направляют в реактор. Осадок ДНК-азы снимают с нутч- фильтра, взвешивают и хранят при температуре не выше +7°С.
По мере необходимости осадок ДНК-азы передают на участок химической очистки ферментов для дальнейшей обработки.
В технологическом журнале записывают число, объем фильтрата, температуру фильтрата, количество сернокислого аммония, время, вес осадка ДНК-азы. Далее фильтрат поступает на стадию ТП.2. Получение химотрипсиногена и аморфного трипсина [20].
ТП.2. Получение химотрипсиногена и аморфного трипсина.
ТП.2.1. Высаливание химотрипсиногена и трипсина из фильтрата. Фильтрат для производства химотрипсина и трипсина собирают в реактор. Измеряют объем фильтрата, а затем с помощью вакуума, небольшими порциями при перемешивании добавляют сульфат аммония до степени насыщения 0,7.
Температуру высоленного раствора поддерживают не выше +5°С.
После высаливания с поверхности реакционной массы осторожно снимают пену. Осадок седиментируется не менее 36 часов при температуре не выше +5°С, автоматически регулируя ее подачей рассола в рубашку реактора.
При частичном всплытии осадка поверхностный слой осторожно перемешивают. По истечении времени седиментации недостаточную жидкость сифонируют в реактор для производства рибонуклеазы. Оставшуюся ферментную массу сливают самотеком на нутч-фильтр, где осадок отделяют, а фильтрат направляют в реактор.
Осадок (первый высол) снимают с нутч-фильтра, взвешивают и хранят при температуре не выше +5°С. По мере надобности осадок передают на участок химической очистки ферментов для его дальнейшей обработки.
В технологическом журнале записывают число, объем фильтрата, температуру фильтрата, количество сернокислого аммония, время седиментации, вес осадка.
ТП.2.2.Растворение осадка и удаление балластных веществ. Осадок первого высола растворяют в емкости в трех объемах дистиллированной воды, охлажденной до +5°С.Фильтруют через слой марли, замеряют объем и высаливают охлажденным до +5-7°С насыщенным раствором сульфата аммония из расчета 587 мл насыщенного раствора сульфата аммония на 1 л раствора. Высаливание ведут при постоянном перемешивании. Для очистки раствора от слизистых и балластных веществ добавляют кизельгур из расчета 10-20 г/л. Раствор отстаивают 15-20 минут, а затем с помощью центробежного насоса передают на нутч-фильтр. Осадок отбрасывают, а фильтрат передают снова в емкость. Фильтрат может быть прозрачным или слегка опалесцирующим.
ТП.2.3. Высаливание химотрипсина и трипсина. Высаливание химотрипсиногена и трипсина проводят в емкости. Для этого измеряют объем фильтрата и постепенно, при перемешивании, тонкой струей добавляют охлажденный насыщенный раствор сернокислого аммония. Раствор отстаивают не менее 30 минут при температуре не выше +5°С. Затем, с помощью центробежного насоса раствор передают на нутч-фильтр, где происходит отделение осадка.
Т.П.2.4. Кристаллизация химотрипсиногена и отделение его от трипсина. Полученный осадок растворяют в емкости в равном объеме охлажденной до +8-12°С дистиллированной воды. В растворе устанавливают рН 3,0 (по универсальной индикаторной бумаге) с помощью 5 н раствора серной кислоты. Далее, из раствора проводят высаливание химотрипсиногена добавлением охлажденного насыщенного раствора сульфата аммония из расчета 1/3 объема к весу осадка. Раствор сульфата аммония добавляют медленно при постоянном перемешивании. Полученный раствор должен быть прозрачным или слегка опалесцирующим. Доводят рН раствора до 5,0 добавлением 5 н раствора едкого натра, рН раствора контролируют по потенциометру – рН 5,5. Затем раствор нагревают на водяной бане до 24-25 °С. Температура воды бани не должна быть выше 30°С. Кристаллизацию химотрипсиногена ведут 20-36 часов при температуре 24-26°С. Конец процесса кристаллизации определяют по появлению прозрачного недосадочного слоя. Осадок кристаллического химотрипсиногена отделяют на воронке Бюхнера. Не снимая с воронки, осадок промывают раствором сернокислого аммония 0,25 насыщения (250 мл насыщенного раствора довести до 1 л дистиллированной водой). Для промывания берут не менее 200 мл на одну воронку. Фильтрат с промывными водами после отделения химотрипсиногена переносят в холодную камеру и передают для получения кристаллического трипсина на стадию ТП.4.
ТП.4. Получение кристаллического трипсина. Все операции по очистке и кристаллизации трипсина проводят при температуре не выше +5°С.
ТП.4.1. Высаливание аморфного трипсина и очистка от балластных веществ. После отделения химотрипсиногена, фильтрат с промывными водами собирают в емкости, замеряют его объем. Доводят рН фильтрата до 3,0 (по потенциометру) 5н раствором серной кислоты. Затем проводят высаливание аморфного трипсина кристаллическим сернокислым аммонием из расчета 304 г на 1л раствора. Высаливание ведут при непрерывном перемешивании. После высаливания раствор отстаивают не менее 1 часа. Выпавший осадок трипсина отделяют на вакуумах, на воронках Бюхнера. Осадок взвешивают и растворяют в трех объемах (к весу осадка) дистиллированной воды, охлажденной до температуры не выше +5°С. Растворение ведут в емкости. Там же осаждают балластные белки. Осаждение проводят охлажденным насыщенным раствором сульфата аммония из расчета: два объема раствора к весу осадка. Для лучшего отделения балластных веществ в раствор добавляют кизельгур из расчета 10-20 г/л и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через слой кизельгура. Фильтрат из колбы Бунзена переносят в емкость. Объем фильтрата замеряют [20].
ТП.4.2. Осаждение аморфного трипсина. Осаждение аморфного трипсина проводят равным объемом (к объему фильтрата) охлажденного насыщенного раствора сульфата аммония. Раствор сульфата аммония добавляют тонкой прерывистой струей со скоростью около 70 мл/мин, при постоянном перемешивании. После высаливания осадок отстаивают не менее трех часов.
ТП.4.3. Смена ионов и кристаллизация трипсина. Прозрачный надосадочный слой сифонируют, а остальной раствор фильтруют на воронках Бюхнера. Толщина слоя осадка на воронках не должна превышать 1 см.
Не давая осадку трипсина подсохнуть, его тут же на воронках промывают небольшим количеством 150-200 мл насыщенного раствора сернокислого магния в 0,02 н растворе серной кислоты. Смену ионов проводят быстро во избежания ослизнения осадка. Далее, осадок взвешивают (включая и медообразный осадок), растворяют в равном объеме (к весу осадка) 0,4 М боратного буфера рН 9,0. Растворение ведут в холодной камере, в емкости.
Растворы для кристаллизации трипсина следует предварительно охлаждать до +5°С.
В растворе трипсина рН доводят до значения 7,6 — 7,8 (по потенциометру) добавлением насыщенного раствора двууглекислого калия. Замеряют общий объем полученного раствора и к нему добавляют равный объем охлажденного насыщенного водного раствора сернокислого магния. Затем вносят затравку перекристаллизованного трипсина (60 г суспензии). Смесь переливают из емкости в бутыль. Бутыль предварительно промывают 0,5% раствором тимола. Горловины бутылей закрывают ватно-марлевыми пробками, пропитанными тем же раствором тимола. По мере высыхания пробки повторно пропитывают 0,5% раствором тимола.
Смесь в бутылях оставляют для кристаллизации при температуре +2÷+7°С на 11-15 суток. Образовавшийся осадок кристаллического трипсина отделяют на воронках Бюхнера или с помощью центрифуги. Фильтрат используют для производства пантрипина.
ТП.4.4. Перекристаллизация трипсина. Осадок переносят в емкость (в холодной камере) и растворяют в 0,02 н растворе серной кислоты. Для лучшего растворения осадка в раствор добавляют по каплям 5 н раствор серной кислоты, рН раствора должен быть ниже 3.0 (по универсальной индикаторной бумаге). Затем рН доводят до 7,6- 7,8 (по потенциметру) 0,4 М боратным буфером рН 9,0, а затем вносят затравку перекристаллизованного трипсина (30 г суспензии).
Кристаллизация начинается через 20-45 минут и ведут ее при температуре не выше +5°С. Кристаллы трипсина могут храниться с недосадочной жидкостью в холодной камере при температуре не выше +5°С.
ТП.4.5. Диализ. Диализ трипсина проводят против дистиллированной воды при рН 2,5-3,0 и температура не выше +7°С. В эмалированную ванну в холодной камере, наливают дистиллированную воду из сборника. Воду в ванне подкисляют соляной кислотой до рН 2,5-3.0 (по универсальной индикаторной бумаге), а затем охлаждают.
Перед диализом кристаллы трипсина отделяют на воронках Бюхнера. Полученный осадок растворяют в семи объемах (к весу осадка), охлажденной до+5-7°С дистиллированной воды, а затем разливают в целлофановые мешки по 100 мл в каждый. Мешочки подвешивают к деревянной рейке и опускают их в подготовленную воду для диализа. Диализ проводят в течение 8-12 часов.
ТП.4.6. Обессоливание. Диализованный раствор собирают в эмалированную емкость, замеряют объем и устанавливают рН 3,0 (по потенциометру) добавлением 10% раствора соляной кислоты. Затем проводят осаждение сульфат — ионов постепенным добавлением 10%-го раствора хлористого бария, начиная с 1/3 объема к весу осадка трипсина, взятого на диализ. Проверяют полноту осаждения сульфат — ионов: для этого в пробирку отбирают 5 мл отфильтрованного раствора и добавляют к нему несколько капель 10% раствора хлористого бария. Проба не должна давать помутнения:
а) если раствор прозрачный, то полнота осаждения сульфат — ионов достигнута;
б) если раствор мутный — полнота осаждения не достигнута,- необходимо в раствор трипсина добавить еще 20-30 мл 10% раствора хлористого бария и вновь проверить на полноту осаждения. Эту операцию проводят до полного осаждения сульфат — ионов. Выпавший осадок отделяют фильтрацией на воронках через складчатые бумажные фильтры из фильтровальной бумаги или центрифугированием. Фильтрацию ведут в холодной камере при температуре не выше +7°С. Фильтрат собирают в промежуточную емкость, далее передают на ионо — обменную колонку для освобождения от избытков ионов бария.
В чистую сухую ионообменную колонку загружают (предварительно залитую 0,5-1,0 л дистиллированной воды) смолу КУ-2-8 в Н форме, из расчета 0,2 кг сухой смолы на 1 кг осадка трипсина, взятого на диализ [17].
Соотношение высоты слоя смолы к диаметру колонки должно быть не менее 2:1. После заполнения колонки смолой, дистиллированную воду сливают, не оголяя слоя смолы.
Раствор трипсина в колонку заливают небольшими порциями, не допуская оголения смолы. Из колонки раствор должен выходить тонкой струей. Его собирают в стеклянный стакан, а потом в емкость. Температура раствора при обессоливании должна быть не выше +7°С. Для этого раствор до подачи на колонку и после выхода из колонки охлаждают льдом. Весь пропущенный через ионно-обменную колонку раствор трипсина порциями проверяют на отсутствие ионов бария: к 5 мл раствора добавляют несколько капель 10% раствора серной кислоты — проба не должна мутнеть.
Если проба помутнела, необходимо прекратить подачу раствора на колонку, заменить смолу КУ-2-8, а раствор, содержащий ионы бария, повторно пропустить через смолу. В обессоленном растворе трипсина устанавливают рН 2,8-3,2 (по потенциометру) добавлением 5Н раствора едкого натрия. Далее, отбирают пробу обессоленного раствора в пробирку и сдают в лабораторию ОТК для определения рН и содержания сухих веществ в 1 мл раствора.
ТП.7. Получение стерильного продукта.
ТП.7.1 Стерильная фильтраци.(прил.5). Перед началом стерильной фильтрации раствора препарата фильтр «Пилот» промывают раствором соляной кислоты. Для этого в емкость заливают раствор соляной кислоты с рН 3,0 (3,5 мл соляной кислоты, разбавленной 1:2, на 12,0 л дистиллированной воды). Воду заливают из расчета: 1 л воды на одну фильтрующую пластину.
ТП.7.2. Стерильный розлив. За 2-3 часа до начала стерильного розлива препарата включают бактерицидные лампы. Непосредственно перед розливом, в бокс вносят кассету, с розливочным шприцем, бутыли со стерильным раствором и другие вспомогательные материалы. Стерильный розлив во флаконы можно вести параллельно с процессом стерильной фильтрации. Розлив осуществляют на разливочной машине с помощью разливочного шприца. Дозу розлива настраивают на дистиллированной воде или непосредственно на растворе и периодически проверяют ее через каждые 3-5 кассет. Кассету с флаконами ставят на стол, снимают крышку, накрывают стерильной салфеткой и начинают розлив по флаконам. Закончив заполнение флаконов в одной кассете, машину розлива выключают. В кассету с флаконами вкладывают этикетку с названием препарата и номера схема. Кассету закрывают крышкой и переносят в морозильную камеру или в сублиматор для проморозки. В конце процесса розлива проверяют стерильность разливаемого раствора. Для этого непосредственно с разливочной машины проводят посев разливаемого раствора на питательную среду. После окончания розлива разливочный узел демонтируют и промывают. Из бокса выносят все инструменты и вспомогательные материалы. Емкость, для приема стерильного раствора вывозят из бокса для промывки.
Подготовка и стерилизация разливочного шприца. Проверяют целостность шлангов и закрывают их отверстия тампонами из безворсовой ткани. Обертывают пергаментной бумагой, смоченной дистиллированной водой, разливочную иглу, металлические части корпуса шприца и шланги. Все детали шприца еще раз заворачивают в пергаментную бумагу и вкладывают в кассету для стерилизации. Стерилизацию проводят в автоклаве в течение 1 часа при давлении 1,0-1,1 атм. После окончания процесса стерилизации кассеты переносят в сушильный шкаф для просушки.
ТП.7.3.Замораживание и сублимационная сушка
7.3.1 Проморозка продукта. Проморозку ведут в морозильной камере или в сублиматоре. Раствор, оставшийся от стерильной фильтрации и розлива, промораживают в морозильном столе.
Подготовка морозильной установки. Проводят внутренний осмотр камеры. В случае необходимости камеру чистят, моют, убирают воду, подсушивают. Затем обрабатывают 0,5% раствором аммиака и ставят в чашках на 2-4 часа 3 % раствор формалина. После обработки морозильную камеру охлаждают до температуры -35-45°С. При достижении данной температуры кассеты с разлитыми флаконами помещают на полки морозилки. Проморозку продукции ведут не менее 8 часов. Допускается промораживание в сублиматоре. В этом случае загрузку продукта проводят при температуре на полках сублиматора -25-30°С. Продукт промораживают не менее 3-4 часов с момента достижения температуры в продукте не выше -30°С. Контроль за температурой полок и продукта ведут по логометру.
7.3.2.Сублимационная сушка ферментов во флаконах. Сушка ферментов происходит на сублимационной установке. Загрузку продукта начинают при температуре на конденсаторе льда -45-50°С, а полок- -25-30°С. Кассеты с флаконами быстро ставят на полки сублиматора; не касаясь руками флаконов. Подключают контакты датчиков температуры продукта.
Регулирование температуры во время процесса сушки осуществляют регулятором температуры, а контроль температуры — по логометру. При достижении температура в конденсаторе льда не выше -50°С, а температуры полок -30°С, переходят к сушке продукта. Сушку ведут при вакууме не выше 100-150 ммк. Контроль вакуума осуществляют по миллиамперметру. Задают температуру нагрева полок и каждый час осуществляют контроль параметров сушки: температуры полок и температуры в продукте. С момента начала сушки Температуру полок увеличивают каждый час на 10°С и доводят температуру в продукте до+30+36°С. После окончания процесса сушки отключают все приборы. Убирают из кассет флаконы, в которых находятся датчики. Каждую кассету с флаконами вынимают из сублиматора и быстро накрывают стерильной салфеткой из безворсовой ткани. Кассеты ставят на тележку и перевозят к столу, для стерильной купорки флаконов.
ТП.8.Упаковка готовой продукции.
ТП.8.1.Закатка флаконов. На флаконы надевают алюминиевые колпачки и обжимают их на закаточной машине. При этом колпачок должен плотно прилегать к резиновой пробке и флакону. Закатанные флаконы высыпают в металлические ящики и направляют на маркировку.
ТП.8.2. Маркировка флаконов и контроль готовой продукции. Закатанные флаконы ставят в специальные кассеты, которые устанавливают в бункере печатной машины и наносят с помощью клише печать со следующим текстом:
- Название препарата.
- Дозировка (количество мг во флаконе)
- Стерильно.
- Номер серии.
- Годен до.
- Номер регистрационного удостоверения.
- Название предприятия
- Цена.
В ходе работы периодически проверяют качество печати. Отпечатанные флаконы высыпают в кассеты и выдерживают на стеллажах в течение суток при комнатной температуре до полного высыхания краски. Затем отпечатанные флаконы отправляют на просмотр. Флаконы просматривают за столом под лампой дневного света. Отбраковывают флаконы по следующим признакам:
- Флаконы с поврежденными или открывшимися пробками.
- Флаконы с неправильной дозировкой препарата.
- Битые флаконы.
- Грязные флаконы.
- С плохим качеством закатки, печати.
Флаконы с плохим качеством закатки освобождают (с сохранением стерильности) от колпачков и вновь направляют на закатку. Плохую печать на флаконах снимают ацетоном или скипидаром и вновь направляют на маркировку. Закатанные и отмаркированные флаконы отбирают для предварительного контроля: химического и бактериологического анализа.
Продукция не прошедшая предварительный контроль, подвергается переработке согласно стадии 3. Переработка отходов. 1.1 Флаконы с препаратом, прошедшие предварительный контроль направляют на упаковку.
ТП.8.3. Упаковка готовой продукции. Флаконы осторожно высыпают на столы расфасовки и вручную укладывают по 10 флаконов в пачки с перегородками (вкладышами). Туда же вкладывают инструкции по применению или листок вкладыш. На каждой пачке предварительно проставляют номер серии и срок годности. Пачки упаковывают в групповую тару в соответствии ГОСТ 17768-90 [2], а затем в дощатые ящики. После получения из лаборатории ОТК положительного ответа контролер ОТК производит приемку готовой продукции и отбор образцов: химический анализ, биологический анализ, арбитраж.
При приемке готовой продукции контролер ОТК проверяет внешний вид, упаковку, маркировку продукции, качество тары на соответствии требованиям ГОСТ 17768-90 [2] и действующей нормативно — технической документацией на продукцию.
При выявлении первого дефекта контролер, прекращает приемку и продукцию возвращают на доработку. Ящики с готовой продукцией окантовывают металлической лентой, забивают гвоздями и отправляют на склад готовой продукции [17].
ПО.1. Переработка возврата.
ПО.1.1. Растворение возврата (переработка производственного брака)
При производстве серий ферментов, не соответствующих требованиям фармакопейной статьи, их подвергают переработке. Отбракованную продукцию во флаконах отправляют на растворение. Для этого флаконы с препаратом вскрывают и устанавливают в кассеты. На разливочной машине разливают по 1 мл (в каждый флакон), предварительно охлажденную до температуре не выше +10°С, дистиллированную воду. На кассету надевают металлическую решетчатую крышку и через нее раствор сливают и передают на последующую переработку в зависимости то вида брака:
а) забраковка препарата по посторонним включениям, недоливу, «вскипевшие», незакатанные, по неправильной дозировке — слитый раствор фильтруют через складчатые фильтры из фильтрованной бумаги и подсоединяют к новой серии на стадии ТП.7.1. «Стерильная фильтрация».
б) забраковка по плохой растворимости или прозрачности — раствор фильтруют через складчатый бумажный фильтр или через пластины для удаления труднорастворимых частиц. Определяют рН раствора и его сухой остаток, а затем раствор может быть присоединен к последующей серии и выпущен как новая серия.
в) забраковка по пониженной активности – слитый раствор подкрепляют обессоленным раствором новой серии препарата с большой активностью. Во вновь полученной серии определяю рН, содержание сухого вещества и направляют на стадию ТП.7.1, для дальнейшей обработки.
г) забраковка по нестерильности – флаконы с препаратом растворяют в дистиллированной воде, определяют содержание сухого остатка и рН, и направляют на стадию ТП.7.1. «Стерильная фильтрация». Раствор присоединяют к последующей серии или выпускают, новую серию.
д) забраковка по токсичности – раствор отправляют на стадию «Обессоливание». Далее обессоленный раствор присоединяют к последующей серии и подвергают дальнейшей обработке.
е) повышенное содержание сульфатов – раствор подсоединяют к последующей серии на стадии ТП.4.4.»Диализ».
ж) забраковка по пирогенности – препарат растворяют, раствор отправляют на стадию ТП.7.1. «Стерильная фильтрация» [20].